紫外可見分光光度法測定白喉烏頭中總生物堿的含量

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試材料

白喉烏頭。

1.1.2供試試劑

烏頭堿對照品；無水乙醇；氨水。

1.1.3供試儀器

電子天平；Ｃ型玻璃儀；循環(huán)水真空；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；UV-1500PC紫外可見分光光度計（上海美析儀器有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；調(diào)溫電熱套；電腦智能溫控低溫超聲波合成萃取儀。

其它儀器：燒杯（5、10、50mL）、容量瓶（10、25、50mL）、移液管（2mL、1mL）、吸耳球、漏斗、濾紙、量筒、吸量管、移液槍。

1.2試驗方法

1.2.1標準溶液的制備

精密稱取烏頭堿對照品0.0109mg，以無水乙醇水溶液為溶劑，于50mL容量瓶中配置成0.002mg·L^－1的對照品標準儲備液，4℃的冰箱中保存。

1.2.2樣品測試液的提取

精密稱取白喉烏頭粉碎的樣品粗粉5g置于50mL錐形瓶中，加入0.50mL氨試液，潤洗。再加35.0mL無水乙醇，超聲波提取3次，每次提取0.5ｈ。將提取物用濾紙過濾，殘渣用無水乙醇洗3～4次，保留濾液，再過濾3～4次，然后合并濾液。通過水浴使溶劑揮發(fā)至無氨味。精密吸取該溶液于50mL容量瓶中，再用乙醇稀釋至刻度，搖勻，配制成供試溶液。按照標準曲線的繪制方法測定一階導(dǎo)數(shù)紫外光譜，計算總生物堿的含量，每批樣品重復(fù)6次。

1.2.3最大吸收定波長的選擇

吸取2mL濾液至10mL容量瓶中，加入乙醇稀釋至刻度。取適量的該溶液至比色皿中，用可見分光光度計，在200～400ｎm波長范圍內(nèi)測定吸光度，最后確定烏頭堿對照品的最大吸收波長（表1）。

1.2.4標準曲線的繪制

用移液管分別移取0.002mg·L^－1烏頭堿對照品溶液2、4、6、8、10mL于10mL的容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，放置10min，以空白的無水乙醇溶液為參比，在最大吸收波長231ｎm處用紫外可見分光光度計測定其吸光度。

1.3項目測定（樣品總生物堿的含量測定）

精密吸取4份1.00mL白喉烏頭樣品溶液，置于25.00mL容量瓶中，各加入無水乙醇至10.00mL。各加入5％亞硝酸鈉溶液0.28mL，搖均，放置6min；加10％硝酸鋁溶液0.28mL，搖均，放置6min；加4％氫氧化鈉溶液2.00mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖均，放置15min。以無水乙醇為對照，采用分光光度法在507ｎm處測定吸光度。根據(jù)標準曲線計算所取樣品溶液中總生物堿含量。根據(jù)吸光度的值計算溶劑中總生物堿的濃度。

總生物堿提取率（％）＝提取液濃度（mg·L^－1）×稀釋倍數(shù)×體積（mL）／稱取樣品（g）×100。

方法來源：[1]阿不力米提·玉麥爾,庫爾班江·巴拉提.紫外可見分光光度法測定白喉烏頭中總生物堿的含量[J].北方園藝,2022,(12):94-98.